治療誘導的衰老癌細胞通過促進核糖蛋白1依賴性PD-L1上調促進癌癥進展

傳統(tǒng)化療和放療誘導的癌癥衰老以增殖不良、耐藥性和衰老相關的分泌表型為特征，因導致癌癥復發(fā)和形成免疫抑制性腫瘤微環(huán)境而備受關注。然而，癌癥衰老與抗腫瘤免疫之間的關聯(lián)尚未完全明了。在這里，作者證明衰老的癌細胞會通過促進PD-L1 的轉錄和糖基化來提高其水平。本研究證明核糖蛋白1 是癌癥衰老過程中PD-L1 糖基化的關鍵調節(jié)因子。通過ER-溶酶體相關降解途徑，核糖體蛋白1可降低PD-L1的升高水平，從而增加衰老癌細胞對T細胞介導的殺傷的敏感性。通過降低PD-L1 水平并提高細胞毒性T 淋巴細胞的活性，核糖體1 的消耗可抑制雄性小鼠的腫瘤生長。此外，核糖蛋白1靶向或抗PD-1療法可減少照射腫瘤中衰老癌細胞的數(shù)量，并通過激活細胞毒性T淋巴細胞抑制癌癥復發(fā)。該研究于2025年1月發(fā)表在《Nature Communications》，IF：14.7。

在常規(guī)癌癥治療后，當腫瘤體積縮小時，免疫抑制性 TME 很可能會得到緩解。這就提出了一個問題：衰老的癌細胞如何才能躲避 T 細胞的直接攻擊，并在沒有免疫抑制 TME 的支持下長期存在？從合成 OT 細胞殺傷試驗中發(fā)現(xiàn)，治療誘導的衰老癌細胞不易受到 T 細胞的監(jiān)視。通過電離輻射（IR）照射誘導表達 OVA 的 B16F10 小鼠黑色素瘤球體和細胞衰老，將這些衰老的癌細胞和球形細胞與從 OT-1 小鼠脾細胞擴增而來的 OT 細胞共同培養(yǎng)。評估這些腫瘤球體內的 T 細胞浸潤情況（圖 1a），并測量癌細胞中的 Caspase-3 活性（圖 1b ）。與對照組（Cont）相比，表達 OVA 的 B16F10 癌細胞球體與 IR 誘導的癌癥衰老（IR-CS）相比，OT 細胞浸潤減少（圖 1a_IR-CS），OVA 表達的 B16F10 細胞在 OT 細胞殺傷試驗中顯示出較低的 caspase-3 活性（圖 1b_IR-CS），這表明衰老的癌細胞已經獲得獨立于 TME 的逃避 T 細胞監(jiān)控的能力。

眾所周知，癌細胞會通過過度表達免疫檢查點蛋白來逃避 T 細胞的監(jiān)控29 ，而最近的報道表明，PD-L1 介導的 T 細胞功能障礙可能是衰老過程中的一個重要機制。事實上，PD-L1 水平在 IR 誘導的衰老球和 H460 細胞中上調（圖 1c、d）。進一步研究其他類型應激誘導的癌細胞衰老中 PD-L1 的表達發(fā)現(xiàn)在多柔比星（DNA 損傷應激；Doxo-CS）（圖 1e）或 PTEN 缺失（非 DNA 損傷應激；PTEN-loss-CS）誘導的癌細胞衰老中，PD-L1 的表達顯著增加（圖 1f 和補充圖 1c_PTEN-loss-CS）。此外，在其他類型的癌細胞中，包括 A549 肺癌、U2OS 骨肉瘤、H1299 肺癌和 HCT116 結腸癌細胞中，也觀察到紅外暴露誘導細胞衰老后 PD-L1 表達增加（圖 1g）。在 PD-L1 基礎表達較低（A549 和 U2OS）和較高（H1299 和 HCT116）的細胞中，IR 都能增加 PD-L1 的表達。這些發(fā)現(xiàn)表明，癌細胞衰老通常會提高 PD-L1 水平，使衰老的癌細胞能夠逃避 T 細胞的監(jiān)控。

先前的研究表明，放療和化療可在治療后早期因 DNA 損傷和其他細胞應激而提高 PD-L1 的轉錄水平。與之前的報道一致，PD-L1 mRNA 水平在紅外照射后兩天內逐漸增加3 到 6 倍。值得注意的是，在紅外暴露后的第四天，當細胞衰老變得明顯時，PD-L1 mRNA 水平激增至 80 倍（見圖 1h）。這意味著 PD-L1 mRNA 的增加可能在衰老晚期更為明顯，而不僅僅是紅外暴露的結果。為研究獨立于紅外誘導的 PD-L1 mRNA 上調而擴大 PD-L1 表達的潛在機制，作者在內源性 PD-L1 基因敲除條件下使用 pCI-neo-PD-L1 野生型（WT）-Flag 質粒。該質粒的啟動子不受紅外誘導應激的影響，因此可以驗證細胞衰老對 PD-L1 的翻譯后調控（圖 1i）。有趣的是，癌癥衰老會顯著提高外源性 PD-L1 的水平，而 PD-L1 的轉錄調控卻不會影響這一水平。此外，在用環(huán)己亞胺（CHX）處理的衰老癌細胞中，PD-L1 蛋白的半衰期明顯延長（圖 1j），這表明癌癥衰老可能會增強 PD-L1 蛋白的穩(wěn)定性。這些結果表明，轉錄調控和翻譯后調控可能協(xié)同導致衰老癌細胞中的 PD-L1 水平升高。

PD-L1 通過細胞內轉運系統(tǒng)經由 ER 和高爾基體轉運至細胞膜。在功能上，由于與 PD-1 的結合發(fā)生在細胞膜上，因此大量與膜結合的 PD-L1 對 T 細胞抑制至關重要。作者仔細研究PD-L1在IR-CS、Doxo-CS和PTEN缺失-CS細胞中的胞內定位，發(fā)現(xiàn)與對照細胞相比，衰老癌細胞的ER、高爾基體和細胞膜上的PD-L1信號明顯增加（圖2a；白色箭頭表示ER的位置，黃色箭頭表示細胞膜的位置，青色箭頭表示高爾基體的位置），表明衰老癌細胞中上調的PD-L1在細胞內主動轉運至細胞膜。流式細胞分析證實，衰老細胞中與膜結合的 PD-L1 數(shù)量大幅增加（圖 2b_IR-CS）。為測量細胞膜上能夠與其受體 PD-1 結合的功能性 PD-L1 的數(shù)量，使用重組 PD-1-FC 蛋白進行結合試驗。結果顯示，與對照組相比，衰老癌細胞中 PD-L1 與 PD-1-FC 的結合率明顯更高（圖 2c_PD-1-FC 綠色）。這些結果表明，癌細胞衰老可以激活上調的 PD-L1 的轉運，從而大大提高細胞表面功能性 PD-L1 的水平。

最近的報道表明，細胞衰老過程中蛋白質糖基化譜發(fā)生顯著變化，因此重點研究癌細胞衰老與 PD-L1 糖基化之間的關系。為確定衰老癌細胞中 PD-L1 糖基化的關鍵調控因子，作者研究了紅外誘導衰老癌細胞產生的微陣列數(shù)據(jù)集中糖基轉移酶及其輔助因子的表達譜。該數(shù)據(jù)集與之前被鑒定為與 PD-L138 有潛在相互作用的 N-糖基化相關因子進行交叉比對。在紅外誘導衰老的H460細胞中，35個N-糖基化相關因子的表達量升高，其中9個與之前被認為與PD-L1相互作用的候選因子相吻合（圖2d）。這九個候選因子的表達變化通過熱圖可視化（圖 2e），并通過 qRT-PCR 驗證（圖 2f）。值得注意的是，9 個候選者中的 4 個 STT3B、DDOST、RPN1 和 RPN2 是 OST-B 復合物的組成成分，與 OST-A 復合物相比，OST-B 復合物對某些類型的未折疊或折疊錯誤的蛋白質具有更高的親和力，這意味著 OST-B 復合物表達的增加促進糖基化過程，以應對癌細胞衰老過程中的應激條件。

為評估每個候選基因對衰老細胞中PD-L1轉錄和蛋白穩(wěn)定性的影響，用靶向9個候選基因的siRNA轉染H460細胞，然后暴露于IR誘導衰老。雖然去除了所有候選基因并不會影響 IR-CS 升高的 PD-L1 mRNA 水平（圖 2g），但沉默 OST-B 復合物成分明顯降低IR 誘導的 PD-L1 蛋白水平的升高（圖 2h）。特別是，沉默 STT3B 和 RPN1 可顯著降低 PD-L1 水平（圖 2h，RPN1 和 STT3B）。沉默 RPN1 和 DDOST 顯示出明顯的條帶移動，這意味著糖基化異常（圖 2h，DDOST 和 RPN1 的紅色箭頭）。就 RPN2 而言，雖然其沉默降低 PD-L1 的水平，但并沒有改變 PD-L1 的帶移、穩(wěn)定性和膜水平（圖 2h）。

為研究 RPN1 在衰老癌細胞中作為 PD-L1 糖基化和穩(wěn)定的潛在關鍵調控因子的作用，利用癌癥基因組圖譜（TCGA）的數(shù)據(jù)集進行一項硅分析。分析的重點是腫瘤和抗腫瘤免疫相關因素，使用基于 R 軟件包的程序 TIMER2.040-42 進行。首先使用 Gene_DE 模塊比較TCGA 所有腫瘤中腫瘤和匹配正常組織的 RPN1 mRNA 表達水平（圖 3a）。結果表明，與正常組織相比，RPN1 mRNA水平在乳腺癌、結直腸癌、膠質母細胞瘤、胃癌和肺癌等不同類型的癌癥中都明顯升高。隨后研究了 PD-L1 和 RPN1 水平與癌癥衰老標志物之間的相關性，這些標志物在衰老時轉錄水平升高，包括基質金屬蛋白酶 (MMP)-2/3、白細胞介素 (IL)-6、胰島素樣生長因子結合蛋白 (IGFBP)3/5/7、CDKN1A (p21) 和趨化因子 (C-C motif) 配體 (CCL5)43（圖 3b）。有趣的是，熱圖上顯示的斯皮爾曼等級相關值表明，大多數(shù)癌癥，尤其是乳腺浸潤癌（BRCA）、結直腸腺癌（COAD）、皮膚黑色素瘤（SKCM）、胰腺癌（PAAD）和前列腺癌（PRAD）等主要癌癥存在正相關。這些結果意味著 RPN1、PD-L1 調控和癌細胞衰老之間可能存在密切關系。

最后，使用細胞組成估算模塊生成一個熱圖表，列出了所有 TCGA 腫瘤中 RPN1 表達水平與 CD8⁺ T 細胞比例之間的 Spearman 相關性。為提高分析的準確性，還分析了干擾素（IFN）-β和缺氧誘導因子（HIF）-1α，已知這兩種因子分別與腫瘤中的 CD8⁺ T 細胞免疫正相關和負相關。研究結果表明，與眾所周知的抗腫瘤免疫抑制因子 HIF-1α 相似，RPN1 的表達與各種腫瘤類型中的腫瘤浸潤 CD8⁺ T 細胞群呈顯著負相關（圖 3c）?？紤]到圖 1 和圖 2 中顯示的結果，對 TCGA 數(shù)據(jù)庫進行生物信息學分析的這些發(fā)現(xiàn)表明，RPN1 可能是導致癌癥衰老過程中 PD-L1 穩(wěn)定的一個關鍵調節(jié)因子，可能對腫瘤發(fā)生過程和抗腫瘤免疫產生有害影響。

PD-L1 有四個N-糖基化位點：如圖 4a（上圖）所示，PD-L1 有四個 N-糖基化位點：N35、N192、N200 和 N21917,24。通過比較 WT PD-L1 與其非糖基化形式 4NQ（N35Q、N192Q、N200Q 和 N219Q）PD-L1，可以看出這些位點高度糖基化（圖 4a）。暴露于 IR-CS 后，完全糖基化的 WT PD-L1 （50-55 kDa）水平顯著增加。轉染 RPN1 siRNA 會導致 WT PD-L1 水平下降，并出現(xiàn)明顯的糖基化異常帶移動。用一種廣譜 N-糖基化抑制劑妥尼霉素處理后，WT PD-L1 的條帶轉移到與缺乏 N-糖基化的 4NQ 突變體（34 kDa）相對應的大小，這證實了妥尼霉素完全抑制 PD-L1 的 N-糖基化。值得注意的是，在所有測試的實驗條件下，都沒有出現(xiàn)低于 4NQ 突變體大小的條帶。進一步轉染 RPN1 siRNA 對 4NQ PD-L1 沒有影響。這些結果表明，由于 RPN1 的缺失，PD-L1 的條帶轉移是由異常的 N-糖基化引起的，這進一步表明 RPN1 與 PD-L1 的 N-糖基化過程有關。

為驗證這一點，對 PD-L1 進行聚糖結構分析。純化的 N-聚糖經色譜分離，并使用 nanoLC/Q-TOF MS 系統(tǒng)進行分析。結果顯示，RPN1 基因敲除后，PD-L1 的總體聚糖水平下降，進一步說明 RPN1 基因耗竭影響的是總聚糖水平（圖 4b），而不是改變 PD-L1 的特定末端聚糖結構（圖 4c-g）。雖然 RPN1 并不具有糖基轉移酶活性，但其重要作用在于促進底物多肽與 OST 復合物催化域的配位和定位，從而提高蛋白質糖基化的效率和精確度。結合之前的這些報道，這些研究結果支持以下結論：RPN1 主要影響 N-糖基化的早期階段，促進預組裝的聚糖在翻譯后立即結合到 PD-L1 多肽中。

為研究 RPN1 缺失對癌癥衰老的影響，通過衰老相關的 β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）活性檢測（圖 5a）研究用三種不同的靶向 RPN1 siRNA 處理的細胞的衰老表型。這些 RPN1 siRNAs 能有效降低 PD-L1 水平（圖 5b），但對 IR 誘導的衰老本身沒有影響（圖 5a）。此外，RPN1 的消耗有效中和了在 Doxo-CS 和 PTEN 缺失-CS 細胞中觀察到的 PD-L1 表達的增加（圖 5c_Doxo-CS 和 5d_PTEN-loss-CS）。此外，還檢測了人類癌細胞系中的 PD-L1 蛋白水平（圖 5e），并分析了在 PD-L1 基礎水平較高（H1975 和 BT549）或較低（H460、A549 和 HCC827）的癌細胞系中敲除或過表達 RPN1 的效果（圖 5f、g）。即使在沒有衰老的情況下，敲除 RPN1 也會降低 PD-L1 水平（圖 5f），而過表達 RPN1 則會提高 PD-L1 水平（圖 5g），這表明 RPN1 在應激和正常條件下對 PD-L1 的穩(wěn)定都至關重要。在 IR-CS 中消耗 RPN1 會導致細胞表面 PD-L1 水平下降（圖 5h_Cont Si + IR-CS vs. RPN1 Si + IR-CS，黃色箭頭表示細胞膜位置；以及圖 5j）以及 PD-L1 與 ER 標記共定位（圖 5h_Cont Si + IR-CS vs. RPN1 Si + IR-CS，黃色箭頭表示細胞膜位置；以及圖 5j）。5h_Cont Si + IR-CS vs. RPN1 Si + IR-CS，白色箭頭表示 ER 的位置）和高爾基體（圖 5i_Cont Si + IR-CS vs. RPN1 Si + IR-CS，青色箭頭表示高爾基體的位置）。

為確定 RPN1 缺失在衰老癌細胞免疫抑制活性中的作用，作者檢測了 PD-1 結合、T 細胞浸潤和 T 細胞介導的殺傷活性。RPN1 的耗竭降低膜結合 PD-L1 的 IR-CS 增強水平（圖 5j），并持續(xù)減少 PD-1 蛋白與細胞表面的結合（圖 5k）。去掉 RPN1 后，OT-1 細胞對 B16F10-OVA 球形細胞的浸潤率（圖 5l）和 OT-1 細胞對 B16F10-OVA 癌細胞的殺傷活性（圖 5m）均明顯恢復，而 IR-CS 則抑制這些活性。綜上所述，這些研究結果表明，RPN1 在通過增加細胞膜上的 PD-L1 水平使衰老癌細胞逃避 T 細胞監(jiān)控方面發(fā)揮重要作用。

具有完整糖基結構的 PD-L1 通過細胞內 ER 至高爾基體轉運系統(tǒng)轉運至細胞表面。相反，異常或未糖基化的 PD-L1 則通過與 ERAD 相關的蛋白酶體降解和/或溶酶體降解途徑降解。為確定 RPN1 在 PD-L1 蛋白的平衡調節(jié)中的作用，作者進行了 CHX 追逐試驗。發(fā)現(xiàn)在用 CHX 處理的 IR 誘導的衰老癌細胞中，RPN1 的耗竭明顯降低PD-L1 蛋白的穩(wěn)定性（圖 6a）。溶酶體抑制劑氯喹（CQ）逆轉了衰老癌細胞中 RPN1 缺失引起的 PD-L1 下調，而蛋白酶體抑制劑 MG132 對 PD-L1 蛋白水平沒有明顯影響（圖 6b）。這表明，RPN1耗竭對PD-L1水平的影響可能涉及溶酶體降解途徑，而不是ERAD。

PD-L1 通過內吞作用在細胞膜上循環(huán)；在這一過程中，功能失調的 PD-L1 通過溶酶體途徑在形成的內體中降解。Rab5和Rab11是內吞和內質體形成過程中不可或缺的物質，它們的敲除不能恢復去除RPN1的衰老細胞中的PD-L1水平（圖6c），這意味著RPN-1調控的途徑可能與另一種不同于循環(huán)過程的溶酶體降解機制有關。最近的研究表明，某些異常蛋白質會進入溶酶體，并通過 ER 溶酶體相關降解（ERLAD）途徑被消除。值得注意的是，IR-CS 增加了序列相似性 134 家族成員 B（FAM134B）（圖 6c）的水平，FAM134B 是一種結合 LC3 的 ER 吞噬受體，是 ERLAD 的關鍵組成部分。當去除 FAM134B 時，去除 RPN1 的衰老細胞中降低的 PD-L1 水平得到恢復（圖 6c）。與此相一致的是，免疫熒光（IF）染色也顯示，CQ 處理 RPN1 缺失的衰老細胞后，PD-L1 與 FAM134B（圖 6d）或 LC3B（圖 6e）的共定位增強。此外，在 CQ 存在的情況下，RPN1 缺失顯著增加 PD-L1 與溶酶體標志物溶酶體相關膜蛋白 1（LAMP1）的共定位，表明 PD-L1 在溶酶體中的積累（圖 6f白色區(qū)域）。這些發(fā)現(xiàn)表明，在衰老癌細胞中，RPN1 的消耗通過 ERLAD 途徑介導 PD-L1 的降解，進一步證明 RPN1 在調節(jié) PD-L1 蛋白平衡中的關鍵作用（圖 6g）。

為驗證RPN1 對放療后腫瘤組織中PD-L1 表達和T 細胞活化的影響，使用免疫功能正常的合成小鼠腫瘤模型進行體內研究。用轉染Cont siRNA（Cont si）或RPN1 siRNA（RPN1 si）的CT26 細胞接種BALB/c 小鼠。第10 天，小鼠暴露于12 Gy 劑量的紅外照射。然后，如示意圖所示，通過瘤內轉染給藥Cont si 或RPN1 si（圖7a_圖底）。暴露于紅外線后，腫瘤大小明顯縮小，第一周內縮小達50%。然而，到照射后第二周結束時，腫瘤又開始生長，幾乎恢復到原來的大小。這一趨勢在所有樣本中都是一致的（圖7a_右上圖，紅線）。然而，值得注意的是，RPN1 si 處理組的腫瘤大小持續(xù)縮小，在整個觀察期間都沒有再生長的跡象（圖7a_ 右下圖，藍線）。實驗結束時，盡管未接受輻照的Cont si 組和RPN1 si 組的腫瘤大小沒有明顯差異，但接受IR 處理的Cont si 組的腫瘤明顯比RPN1 si 組小很多（圖7a_右下圖，藍線）。

與作者提出的機制一致，IR-CS能顯著提高腫瘤樣本中PD-L1 和RPN1 的水平（圖7d、e）。此外，RPN1 si 處理抑制了IR-CS 誘導的PD-L1 表達上調（圖7d、e）。與我們的體外實驗結果（圖5 和圖6）一致，腫瘤裂解液的免疫印跡顯示，在暴露于IR 的腫瘤中，PD-L1和RPN1 之間存在明顯的正相關性（圖7f ）。與這些結果一致的是，RPN1的耗竭明顯增加CD8⁺ T 細胞在IR-CS 下腫瘤組織中的浸潤和活性（如顆粒酶B 的表達所示；GB）（圖7g-i），這反過來又促進了衰老腫瘤組織的凋亡（圖7j）。

為進一步驗證基于T 細胞的RPN1 靶向療法的療效，作者測量了IR 與Cont si 或RPN1 si 瘤內轉染結合后的腫瘤生長和長期存活率，無論是否有CD8 T 細胞耗竭。結果是，瘤內RPN1 基因耗竭抑制了IR 治療后的癌癥復發(fā)（圖7k_Cont si + IR-CS + IgG vs RPN1 si + IR-CS + IgG），并大大提高動物的存活率（圖7l_Cont si + IR-CS + IgG vs RPN1 si + IR-CS + IgG）。與本研究機制研究一致，用抗CD8 mAb 治療進行CD8 ⁺ T 細胞耗竭有效地中和了 RPN1 靶向治療的益處（圖7k_RPN1 si + IR-CS + IgG vs RPN1 si + IR-CS + α-CD8 mAb 和圖7l_Cont si + IR-CS + IgG vs RPN1 si + IR-CS ⁺ α-CD8 mAb）。這些發(fā)現(xiàn)共同表明，抑制RPN1 的表達可以抑制放療誘導的衰老腫瘤中PD-L1 的增加，從而有可能通過增強抗腫瘤免疫力來防止癌癥復發(fā)。

圖 7 中的結果表明，通過瘤內 siRNA 遞送應用 RPN1 靶向治療可激活腫瘤組織內的 T 細胞免疫并下調 PD-L1。為評估 RPN1 靶向療法對衰老癌細胞的影響，作者分析 SA-β-Gal 活性和 p21 表達水平，這是癌癥衰老的既定標志物。暴露于紅外的腫瘤樣本顯示出 SA-β-Gal 活性和 p21 表達水平的明顯增加，而用 RPN1 si 治療的腫瘤樣本則顯示出紅外誘導的這些參數(shù)的顯著降低（圖 8a-c）。腫瘤裂解液的免疫印跡分析顯示，在紅外暴露的腫瘤中，p21 和 RPN1 之間存在明顯的正相關性（圖 8d）?？傊?，這些結果表明，衰老的癌細胞很可能因 RPN1 缺失引起的 PD-L1 損失而被 T 細胞免疫所消滅。

為進一步探索這一假設，在IR-CS動物模型中分析給予抗PD -1治療性抗體后的衰老癌細胞群。將CT26細胞植入BALB/c小鼠體內，于接種后第13天進行12 Gy的照射，抗PD -1治療性抗體通過腹腔注射給藥。考慮到適合分析的腫瘤大小和較高的CTL活性，我們在第二次給予抗PD -1抗體后1天進行了采樣。有趣的是，與rpn1靶向治療的結果相似，抗PD -1治療性抗體治療組的SA-β-Gal活性（圖8f）和p21表達水平（圖8g）降低，同時腫瘤內CTL活性增加（圖8h-j）。這些結果支持通過PD-L1/ PD -1特異性療法，T細胞免疫可以有效地靶向和消除輻射誘導的衰老癌細胞。

最后，通過4個月以上的長期觀察，評估T細胞免疫與ICB清除衰老癌細胞的相關性及其治療價值。將CT26細胞植入BALB/c小鼠體內，于接種后第11天進行12 Gy的照射。如圖所示（圖8k_底部），通過腹腔注射給予抗PD -1治療性抗體和抗CD8耗竭性抗體。與IR單藥治療組相比，IR聯(lián)合PD-1阻斷組顯示出更有效的腫瘤抑制和更長的無復發(fā)生存期（圖8k， 1 α-PD-1 mAb + IR- cs + IgG），并且聯(lián)合治療的這些益處被CD8⁺ T細胞清除抵消（圖8k， 1 α-PD-1 mAb + IR- cs + α-CD8 mAb）。這些結果清楚地表明，清除PD - l1陽性衰老癌細胞可以通過T細胞免疫抑制癌癥復發(fā)，從而增強治療效果。

綜上所述，本研究結果表明，常規(guī)療法可以通過解除抑制T細胞的TME來恢復腫瘤內CTL活性。然而，治療誘導的衰老癌細胞的PD-L1表達增加；這就創(chuàng)造了一個“保護傘”，可以潛在地保護殘留的癌細胞不受CTL監(jiān)視。少數(shù)存活的殘余癌細胞可以增殖并重新建立抑制T細胞的TME，導致復發(fā)。因此，通過RPN1靶向和/或PD-L1/ PD -1靶向治療靶向這些表達PD-L1的衰老癌細胞可能成為一種有希望的方法，以提高治療效果和預防癌癥復發(fā)（圖8m）。

TCGA數(shù)據(jù)分析、質譜分析、qRT-PCR、Western blotting、RNA干擾、免疫共沉淀、GST pull-down、體外甲基化測定、基因組DNA提取和基因分型PCR、細胞培養(yǎng)、細胞轉染、衰老相關的β-半乳糖苷酶染色、免疫熒光、PD-1結合實驗、三維球體形成、T細胞浸潤實驗、T細胞介導的殺傷實驗、流式細胞術、裸鼠皮下注射模型、輻照腫瘤模型、免疫組化

Hwang HJ, Kang D, Shin J, Jung J, Ko S, Jung KH, Hong SS, Park JE, Oh MJ, An HJ, Yang WH, Ko YG, Cha JH, Lee JS. Therapy-induced senescent cancer cells contribute to cancer progression by promoting ribophorin 1-dependent PD-L1 upregulation. Nat Commun. 2025 Jan 3;16(1):353. doi: 10.1038/s41467-024-54132-1. PMID: 39753537; PMCID: PMC11699195